多发性硬化症（Multiple sclerosis,MS）是一种影响中枢神经系统的慢性自身免疫、炎症和神经退行性疾病。在MS的发病机制中，除了特殊的T细胞会引起脑部炎症和病变，B细胞也会产生促炎细胞因子和髓鞘蛋白自身抗体，直接攻击神经组织，导致神经损伤和功能障碍。那么，如何针对B细胞开展相关研究？EAE模型又如何发挥作用？集萃药康带你了解。

何为EAE模型？

经典的实验性自身免疫脑脊髓炎（Experimental Autoimmune Encephalomyelitis, EAE）是进行MS研究的重要动物模型。用MOG_35-55免疫的EAE模型以特异性致敏的CD4⁺T细胞介导为主的，B细胞不被免疫原激活；用MOG_1-125免疫的EAE模型， B细胞被激活，作为抗原提呈细胞促进细胞因子的产生及产生抗体的浆细胞的分化。

Fenebrutinib是一种口服、可逆、非共价BTK抑制剂，可阻断BTK的功能。同时，Fenebrutinib是B细胞和小胶质细胞激活的双重抑制剂，这种双重抑制可能减少MS疾病活动和残疾进展。近期临床数据表明，Fenebrutinib是目前多发性硬化症III期试验中唯一的可逆抑制剂。在B细胞激活的EAE模型中，集萃药康对Fenebrutinib进行了药效评价，初步研究结果表明，Fenebrutinib可以缓解小鼠体重降低现象，明显降低EAE的评分。

B细胞依赖的EAE模型

D0时使用含有MOG_1-125的弗氏佐剂对C57BL/6小鼠进行免疫并注射百日咳毒素。在小鼠免疫2天后，再次注射百日咳毒素工作液诱导B细胞依赖EAE模型。

图1. 模型构建策略

模型组小鼠从D8开始体重下降，D9出现大幅度降低，EAE的评分明显增加，流式检测脑组织中免疫细胞水平，发现mB220⁺ cell以及m CD4⁺T细胞水平有上升的趋势，同时血清中mIgG在D14以及D28显著增加，anti-hMOG_1-125-mIgG在D28时有升高趋势，表明该模型是B细胞依赖的EAE模型，可以为B细胞药物药效研究提供有效的评价工具。

图2. B细胞依赖的EAE模型小鼠表型

(A) 小鼠体重变化情况；（B）)EAE评分数据；（C）流式检测脑组织中mB220⁺ cell以及m CD4⁺T细胞的比例；（D）ELISA检测血清中mIgG以及anti-hMOG_1-125-mIgG。

模型组脑组织HE及LFB染色评分显著高于对照组，出现明显炎性细胞浸润以及神经纤维脱髓鞘的表型。

图3. B细胞依赖的EAE 模型小鼠H&E及LFB染色

B细胞依赖的EAE模型用于药效评价实验

集萃药康利用BTK抑制剂Fenebrutinib在B细胞依赖的EAE模型中进行了药效评价，目前数据已经初步表明，Fenebrutinib能明显的缓解体重降低以及小鼠EAE评分的情况。

图4. B细胞依赖的EAE 模型药效评价

EAE模型能够模拟出人类MS的诸多表型，是目前公认的MS理想动物模型。为更好地服务临床前B细胞靶向的自免药物的评价，集萃药康基于对动物模型和其非临床评价的深刻理解，结合药物MoA，开发了一系列B细胞驱动的自身免疫性疾病动物模型，如狼疮、免疫性肾炎、干燥综合征、神经免疫性疾病等，适用于多种B细胞药物的非临床评价场景，欢迎咨询合作。