随着代谢疾病研究进入多靶点与联合干预阶段，GLP-1R 已成为成熟且持续迭代的核心研究靶点，GIPR 激动与拮抗策略也正逐步成为下一代代谢药物研发的重要方向。
当 GLP-1R 激动与 GIPR 拮抗在同一肥胖代谢背景下联合布局，能否进一步拓展单药在体重与代谢指标上的观察范围？
本研究以单靶点人源化模型的药理药效验证为起点，进一步在 B6-hGLP-1R/hGIPR 双人源化 DIO 小鼠中开展 28 天给药研究，从体重、摄食、体成分、糖耐量及脂质代谢等多个维度，系统评价 GLP-1R agonist、GIPR antagonist 及联合干预的体内药效表现，为前沿双通路策略提供临床前评价参考。
01 单靶点验证
建立可重复的人源化受体药理药效响应
首先，我们分别在 hGLP-1R 和 hGIPR 单靶点人源化模型中进行了药理药效验证。
在 B6-hGLP-1R DIO 小鼠中，某口服 GLP-1 受体激动剂（阳性对照药）持续给药后呈现可观察到的体重下降及体脂减少效应，显示该模型能够稳定表征 GLP-1R 激动剂的体内药效特征。
图1：B6-hGLP-1R DIO 小鼠对口服 GLP-1 受体激动剂呈现可辨别的体重下降与体脂变化
雄性 B6-hGLP-1R DIO 小鼠经高脂饮食诱导后接受 4 周给药。实验设置 Vehicle、某口服 GLP-1 受体激动剂（1 mg/kg，p.o.）及某注射型 GLP-1 受体激动剂（5 nmol/kg，s.c.）组，并评价体重及终点体成分。
在 B6-hGIPR 小鼠中，DA-GIP 可观察到下丘脑弓状核（ARC）区域 c-Fos 阳性细胞数量增加，显示人源化 GIPR 可有效介导中枢药理学信号响应。
图2：DA-GIP 可激活 hGIPR 小鼠 ARC 神经元，验证人源化 GIPR 的中枢功能响应
B6 与 B6-hGIPR 小鼠接受 Vehicle 或 DA-GIP 脑室内给药，通过免疫荧光检测并定量 ARC 区域 c-Fos 阳性细胞。
进一步在 B6-hGIPR 小鼠中开展 IPGTT。与 GIP 单独给药相比，联合 GIPR antagonist 后血糖曲线及 AUC 出现回升，表明该拮抗剂可观察到阻断 GIP 介导的降糖效应，进一步验证模型对 GIPR 激动与拮抗作用均具有可辨别的药理药效响应。
图3：GIPR antagonist 可阻断 GIP 降糖效应，验证模型对拮抗机制的功能响应
雄性 B6-hGIPR 小鼠接受 GIP（5 nmol/kg，s.c.），并联合 Vehicle 或 GIPR antagonist（6 mg/kg，p.o.），随后进行 IPGTT，检测 0-120 min 血糖并计算 AUC。
由此，hGLP-1R 与 hGIPR 单靶点模型分别从体重变化、中枢信号及糖代谢功能层面完成药理药效验证。
在此基础上，由两个单靶人源化品系繁育获得 B6-hGLP-1R/hGIPR 双人源化小鼠，将两条人源受体通路整合于同一体内系统，为 GLP-1R × GIPR 双靶点及联合用药策略提供统一、系统的药效评价平台。
02 双人源化 DIO 模型
联合干预进一步拓展体重下降范围
雄性 B6-hGLP-1R/hGIPR 小鼠经 14-16 周高脂饮食诱导后，连续给药 28 天。
实验设置 Vehicle、某口服 GLP-1 受体激动剂（1 mg/kg，p.o.）、GIPR antagonist（6 mg/kg，p.o.）以及联用组，并系统评价体重、摄食量、体成分、糖耐量及脂质代谢。
图4：B6-hGLP-1R/hGIPR 双人源化 DIO 小鼠：一体化评价 GLP-1R × GIPR 联合策略
28 天给药后，联合组体重较基线下降约 20%，数值上高于 GLP-1 受体激动剂单药组（约 10%）和 GIPR antagonist 单药组（约 7%），显示双通路联合干预具有进一步提升体重下降幅度的观察趋势$${}^{[1-3]$$。
同时，联合组累计摄食量相对较低，体重与摄食变化呈现一致的整体药效趋势。
图5：联合干预约 20% 体重下降，体重变化幅度在数值上高于任一单药
联合组的体重下降幅度在数值上高于两个单药组的简单相加。基于当前实验设计，我们不对药理学"协同作用"作严格定义，但结果清晰显示：GLP-1R 激动与 GIPR 拮抗联合干预的体重下降效果在数值上高于任一单药，为该组合策略的进一步开发提供了体内实验参考依据。
03 不止体重变化
体成分揭示脂肪量下降的质量特征
下一代减重相关药物的研究关注点已从"体重下降幅度"进一步走向"体成分变化构成"。体成分因此成为评价体重变化质量的重要维度。
qNMR 结果显示，联合组的 fat mass 与 fat % 降幅相对明显，提示较强的体重下降效应主要伴随脂肪量的进一步下降。
与此同时，各给药组 absolute lean mass 均有一定下降；联合组 lean % 升高，主要反映脂肪量在总体重下降中的贡献相对更大。
图6：联合干预带来更明显的脂肪减少，体现体成分评价的参考价值
整体来看，联合干预不仅扩大了体重下降幅度，也呈现更突出的脂肪减少特征。需要注意的是，lean % 上升并不能直接等同于肌肉量或肌肉功能得到保护，后续可结合肌肉质量与功能终点进一步评价$${}^{[4]$$。
04 糖代谢观察
联合组葡萄糖耐量表现相对突出
连续给药 28 天后进行 IPGTT。
结果显示，GLP-1 受体激动剂相关治疗组的血糖曲线明显降低，其中联合组 glucose AUC 相对较低；GIPR antagonist 单药组亦观察到一定程度改善。多组间呈现可区分的药效梯度。
图7：联合组 glucose AUC 数值较低，呈现较优的整体葡萄糖耐量趋势
结果表明，联合干预在强化体重、减脂效应的同时，进一步观察到葡萄糖耐量的改善，体现出体重变化之外的多维代谢变化趋势$${}^{[1,3]$$。
05 肝脏脂质观察
联合干预降低肝脏脂质负荷
除体重、体成分和糖代谢外，联合组在肝脏脂质终点同样呈现可观察到的改善趋势，进一步拓展了该联合策略的代谢观察维度。
研究终点时，联合组 hepatic TG 数值低于 Vehicle、GLP-1 受体激动剂和 GIPR antagonist 组。
图8：联合组肝脏 TG 降至较低水平，显示更广泛的代谢变化潜力
联合干预进一步观察到肝脏甘油三酯水平降低，提示其在体重和脂肪积累变化之外，也可能对肥胖相关的肝脏脂质沉积产生积极影响。
06 平台能力
从单靶点功能验证到双靶点药效研究，本研究构建了 hGLP-1R × hGIPR 的体内评价链条。单靶模型对受体激动/拮抗均呈现可辨别的药理学响应，双人源化 DIO 模型则在同一疾病背景下实现对联合策略的多维、系统评价。
在 B6-hGLP-1R/hGIPR 双人源化 DIO 小鼠中，GLP-1R 激动 + GIPR 拮抗联合干预呈现出一致且具有区分度的多维代谢变化：约 20% 的体重下降、更明显的脂肪减少、较低的 IPGTT AUC，以及较低的肝脏 TG 水平，整体药效在数值上高于任一单药。
这些结果体现了 B6-hGLP-1R/hGIPR 双人源化 DIO 模型在前沿肥胖药物研发中的应用价值：以人源靶点为基础，以成熟 DIO 表型为疾病背景，并通过体重、摄食、体成分、糖代谢和脂质代谢等多维终点形成较为完整的评价体系。该平台可用于 GLP-1R/GIPR 双靶点分子、联合用药及下一代 incretin 策略的临床前筛选与机制研究，为减重与代谢药物研发提供稳定、可拓展的体内研究工具。
参考文献
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[2] McClean PL, et al. Am J Physiol Endocrinol Metab. 2007;293:E1746–E1755.
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