集萃药康依托成熟的CRISPR-Cas9技术和完善的细胞培养体系，主要通过人工核酸酶实现对基因组的特定基因序列的敲除、插入或精确修饰，致力于为基础研究、抗体验证、药物筛选、疾病诊断、治疗和检测等方面提供大力支持。

三种基因敲除小鼠技术与原理：

1、es打靶基因敲除技术

以ES细胞为媒介获得基因编辑小鼠模型的打靶技术，相对于CRISPR/Cas9技术较适用于制作编辑策略复杂或插入片段较大的小鼠模型。

集萃药康业务详情：ES打靶技术是通过同源重组将外源DNA定点整合入ES细胞基因组中，以ES为中介获得动物模型的基因编辑技术。通过ES打靶技术制作KO、cKO、KO-first、KI/PM基因编辑小鼠。

>>>ES打靶技术小鼠模型详细介绍

2、CRISPR-Cas9技术

通过CRISPR-Cas9技术制备特定基因修饰的小鼠模型。CRISPR-Cas9是目前最常用的基因编辑技术，可用于制备CKO/KO/KI/PM等类型基因编辑小鼠。

集萃药康业务详情：CRISPR-Cas9是一种通过Cas9/gRNA复合物对靶基因位点进行切割诱导DNA修复的方式实现特定基因修饰的基因编辑技术。CRISPR-Cas9是目前最常用的基因编辑技术，相对于其他技术(TALEN、ZFN、ES技术)有简单，快速，成本低等优点，目前GPTech每年CRISPR-Cas9技术构建小鼠模型通量超6000例，并且还在不断增加中，构建能力位于世界前列。通过CRISPR-Cas9技术制作KO、CKO、KI、PM基因编辑小鼠。

CRISPR-Cas9 KO策略示意图

>>>CRISPR-Cas9技术小鼠模型详细介绍

3、细胞系基因敲除定制

集萃拥有成熟的CRISPR-Cas9体系，脱靶效应更低，编辑效率更高效;可以进行细胞基因敲除、基因敲入、基因过表达、Luciferase修饰等多种类型的基因编辑;可以根据不同细胞特点选择适宜的转染或感染方法(脂质体转染、电转染及慢病毒感染)。

>>>细胞系基因敲除品系种类

常用基因敲除小鼠模型品系：

一、完全性基因敲除小鼠

完全性基因敲除是通过基因敲除技术，把需要敲除目的基因的所有外显子或几个重要的外显子或者功能区域敲除掉，获得全身所有的组织和细胞中都不表达该基因的小鼠模型。应用用于研究某个基因(要求该基因非胚胎致死性基因)对全身生理病理的功能。

二、条件性基因敲除小鼠

条件性基因敲除是通过把两个LoxP位点插入到目的基因的一个或几个重要外显子的两端以制备出floxed小鼠， 该floxed小鼠在与表达Cre重组酶小鼠杂交之前，该目的基因表达完全正常，而当该floxed小鼠与组织特异性表达Cre酶的小鼠进行杂交后，可以 在特定的组织或细胞中敲除该基因，而该基因在其它组织或细胞表达正常。

条件性基因敲除（cKO）示意图

应用

1、用于具有胚胎致死性目的基因的研究;

2、用于研究基因在特定的组织或细胞中的生理病理功能;

3、与控制Cre或Flp表达的其它诱导系统相结合，还可以对某一基因的表达同时实现在时间和空间两方面的调控。

三、基因敲入小鼠

基因敲入可以在目的基因位置引入特定的突变或外源基因。比如在目的基因上引入点突变(模拟人类遗传疾病模型) ;或将报告基因(如EGFP，mRFP，mCherry，mYFP，或LacZ等)通过同源重组的方式引入目的基因的特定位点，从而可以通过报告基因来跟 踪目标基因的表达。也可以用报告基因取代小鼠本身的基因，使KO/KI同时发生。

应用

1、用于药物筛选相关研究;

2、用于信号通路的研究;

3、用于示踪的相关研究。

四、人源化小鼠

人源化小鼠模型是指带有功能性的人类基因、细胞或组织的小鼠模型。这种模型通常被用于人类疾病体内研究(in vivo study)的活体替代模型。由于人类生理与动物生理有显著的差别，利用动物模型得到的实验结果有时不能适用到人体上。比如， 有些利用小鼠等动物模型开发 的药物在人体上并没有效果。所以，利用转基因或同源重组的方法，将人类基因“放置”在小鼠模型上所制备的人源化小鼠模型，大大提高了这类小鼠模型作为模拟 某些人类疾病的有效性。

应用

1、在艾滋病、癌症、传染病、人类退化性疾病、血液病研究领域等都有广泛的应用;

2、药物临床前模拟实验。