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hepg2细胞是什么细胞|hepg2人肝肿瘤细胞细胞培养方法

2024-05-30

HepG2的中文名为人肝肿瘤细胞,在M-NSG小鼠皮下接种后,能正常成瘤,其广泛地应用于遗传毒理学及病毒培养等研究。


hepg2细胞概述:

HepG2细胞是来源于一个15岁白人的肝癌组织;分泌多种血浆蛋白:清蛋白、α2-巨球蛋白、血纤维蛋白溶酶原、转铁蛋白等;模式染色体数为55;该细胞在免疫抑制小鼠中不致瘤;是一个合适的转染宿主;表达标志物包括胰岛素受体;胰岛素 样生长因子II(IGF II)受体。

HepG2可以分泌多种血浆蛋白,主要用于肝癌的实验研究。可以研究细胞的增殖活性、凋亡能力、对药物的反应等情况,也可以将HepG2细胞种植在小白鼠或大鼠的体内形成人工的肝细胞癌,之后用药物来治疗这种人工的肝细胞癌,观察用药治疗的效果。


hepg2细胞培养技巧:

HepG2 细胞并不容易培养好。以下培养技巧来自丁香实验,希望对有需要人有帮助。


一、HepG2 细胞的复苏条件

1. 复苏温度的选择

快速将所冻存的细胞在 40℃ 水浴摇床中慢摇至其溶解,溶解后马上转入 37 ℃ 水浴箱,手工慢摇恒温 2~3min 复苏。复苏后 800 转/ min 离心 5min,吸去上清加入 10ml 含 15% 胎牛血清 DMEM 培养基,混匀后加入细胞培养板,每孔 1 ml,在 5% CO2 温箱 37℃ 培养。

2. 复苏用培养基的选择

研究表明,使用 DMEM 培养基可以节省血清,HepG2 细胞贴壁所用时间短、增殖速度快。此外,使用 DMEM 培养基进行细胞复苏,能够避免配制不同培养基所带来的麻烦。

3. 复苏时的接种密度

当细胞的接种密度为 1×104/cm²,培养基的血清含量为 20% 时,细胞贴壁及增殖速度最快,5d 后可按 1:3 比例传代为最 佳条件。


二、消化酶及消化时间的选择

在进行 HepG2 细胞的消化时,先用 pH7.2 的 PBS 洗涤三遍后,再用 0.25% 的胰蛋白酶溶液消化 0.5 分钟效果比较好。

此外,丁香实验也推荐此种消化方法:用1×PBS 将细胞洗涤 2 次 再加入适量的 0.15% 胰蛋白酶(含有 0.02% EDTA并以 7:3 的体积比混合)覆盖细胞约 20 秒后吸去胰蛋白酶(含有 0.02% EDTA 并以 7:3 的体积比混合)。


三、培养基中血清浓度的选择

由于人肝癌细胞株生长缓慢,恶性程度较高,对于血清的要求比较严格,其培养时所需要胎牛血清的浓度要比一般的肿瘤细胞高一些。在含 15% 胎牛血清的 DMEM 培养基中,HepG2 人肝癌细胞生长速度最快。

  

四、双抗浓度的选择

通过正交实验优选发现,培养基中双抗浓度为 0.5% 时传代效果较好,培养条件易于控制,且细胞能顺利生长。


五、培养基 pH 条件的选择

通过正交实验优选发现,pH7.2 时细胞传代效果较好,条件易于控制,且细胞能顺利生长。


六、细胞传代条件的选择

研究表明,HepG2 细胞汇合度在 95%-100% 时进行传代,效果最 佳。