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高盐饮食小鼠模型构建

2024-06-05

高盐饮食小鼠模型根据研究目的不同,构建方法有所不同,下面整理几种高盐饮食小鼠模型研究与构建。


高盐饮食小鼠模型相关研究:

1、《自然》论文:高盐饮食与小鼠认知下降有关

2019年10月《自然》在线发表的一项研究Dietary salt promotes cognitive impairment through tau phosphorylation确认了食盐摄入与小鼠认知功能之间的因果关系。该研究发现,喂食小鼠极高盐饮食会导致经过修饰的tau蛋白聚集,而tau蛋白又与导致痴呆的疾病有关,如阿尔茨海默病。需开展进一步研究确定该结果是否适用于人类。

高盐饮食(含盐量为普通小鼠饮食的8-16倍)小鼠辨认新物体的能力和迷宫实验的表现都有所下降。作者表明,高盐摄入会减少一氧化氮的合成,激活一种参与tau蛋白磷酸化的酶:CDK5。而恢复一氧化氮合成可以让小鼠的认知障碍得到逆转。作者指出,喂食小鼠的高盐饮食超过了已报告的最高人类摄盐量(每日4-5克推荐量的3-5倍)。不过,研究结果明确了饮食习惯和认知健康之间一条此前未知的关联通路,说明避免高盐饮食或有助于维持认知功能。


2、短期高盐饮食对过敏性哮喘小鼠气道炎症的影响

研究来源:郭兴悦, 李琴, 申云琴, 田泽众, 邹进超, 杨燕, 陈彦球. 短期高盐饮食对过敏性哮喘小鼠气道炎症的影响[J]. 中山大学学报(医学科学版), 2021, 42(6): 864-873.

【目的】探讨短期高盐饮食对过敏性哮喘小鼠气道炎症的影响。

【方法】20只4 周龄雌性 BALB/c 小鼠随机分为 4 组,即正常对照组、过敏性哮喘模型组、4%高盐饮食组和8%高盐饮食组。卵清蛋白 (OVA) 致敏和激发建立过敏性哮喘模型,正常组和模型组给予普通饲料和饮水,高盐饮食组分别给予4%和8%的高盐饲料以及1%的盐水。25 d后,在最后一次激发时观察各组小鼠的鼻部症状,24 h后处死小鼠。五分类血细胞分析测定全血中各亚型炎症细胞,苏木精-伊红(HE)染色观察肺部嗜酸性粒细胞浸润情况,过碘酸-雪夫(PAS)染色观察肺组织杯状细胞增生情况,流式细胞术检测肺组织中辅助性T 细胞1(Th1细胞)、Th2、Th17细胞和调节性T细胞(Treg细胞)比例,酶联免疫吸附法(ELISA)测定肺泡灌洗液(BALF)中的细胞因子白介素-4(IL-4)、IL-5、IL-13和IL-17的水平。

【结果】与过敏性哮喘模型组相比,4%与8%高盐饮食均可以显著降低过敏性哮喘小鼠血嗜酸性粒细胞比例、肺组织Th17细胞比例以及BALF中IL-13与IL-17的水平,但8%高盐饮食降低IL-13水平的效果比4%高盐饮食更明显(P<0.05);而仅有8%高盐饮食可显著缓解过敏性哮喘小鼠鼻部症状,改善肺组织嗜酸性粒细胞浸润以及杯状细胞增生情况,降低肺组织Th2细胞比例和Th2/ Th1比值,减少BALF中细胞因子 IL-4和IL-5的表达水平(P<0.05)。

【结论】短期高盐饮食可缓解过敏性哮喘小鼠的气道炎症,且8%高盐饮食改善效果优于4%高盐饮食。

 

3、高盐饮食喂养小鼠多种代谢组织的转录组分析

来源:Transcriptome Analysis of Multiple Metabolic Tissues in High-Salt Diet–Fed Mice.Frontiers in Endocrinology,2022年5月

研究单位:复旦大学

研究介绍:

高盐饮食(HSD)与代谢失调和代谢紊乱有关。尽管先前的研究表明其对代谢组织的影响,但其分子机制尚不清楚。在本研究中,研究者通过RNA测序对HSD喂养的小鼠模型的多种代谢组织进行了全面的转录组分析。观察到,在HSD小鼠组的白色脂肪组织和肝组织中,与从头脂肪生成和胆固醇生物合成相关的几个基因显著下调,如Fasn、Scd1、Acaca和Thrsp。此外,结合分泌组数据集,研究者的结果进一步证明,HSD可以改变代谢组织中的有机因子的表达水平,例如肝脏组织中的Tsk和Manf,从而可能介导不同代谢组织之间的串扰。研究者的研究为HSD在多种代谢组织上的分子特征提供了新的见解。

材料与方法:

材料:

6周龄雄性C57BL/6小鼠购自上海林昌实验动物中心,饲养在中国上海交通大学医学院实验动物科学系。随机分为两个主要组,分别采用正常饮食和HSD(8%NaCl)。所有小鼠均被安置在21℃±1℃,湿度为55%±10%,光照周期为12小时/12小时。在第12周结束时进行分析。之后,将小鼠麻醉并处死。获得全肝组织、附睾WAT(eWAT)和腹股沟WAT(iWAT);记录肝脏、总eWAT和总iWAT脂肪重量。采集组织样本,包括肝脏、WAT和股四头肌(QU),用于进一步分析。

方法:

RNA提取、转录组分析和qPCR分析

使用传统的TRIzol方法从肝脏、eWAT和QU肌肉中提取RNA。在构建文库之前,所有样品都经过以下三个步骤:(I)NanoDrop用于RNA纯度检查,OD260/OD280在1.95-2.05的范围内;(ii)琼脂糖凝胶电泳用于RNA完整性和潜在污染;和(iii)Agilent 2100用于确认RNA完整性。

通过使用TruSeq链总RNA文库制备试剂盒(Illumina,San Diego,CA,USA)使用rRNA去除的RNA构建RNA文库。使用BioAnalyzer 2100系统对文库进行质量控制和量化。从Illumina NovaSeq 6000测序仪获得成对的末端读数,并通过Q30进行质量控制。用cutadapt软件(v1.9.3)修剪3′衔接子并去除低质量读数后,用hisat2软件(v2.0.4)将高质量的干净读数与参考基因组(UCSC MM10)进行比对,使用cuffdiff软件(cufflinks的一部分)获得基因水平的FPKM作为mRNA的表达谱。使用DESeq2 R软件包对两组进行差异表达分析。对于RNA-seq,调整后的错误发现率(FDR)<0.05和|Fold Chang|≥2被用作鉴定差异表达基因(DEG)的截止值。

通过prime script RT Master Mix(Takara,RR036A)将1 g总RNA逆转录为cDNA。用SYBR Green Master Mix(Thermo Fisher Scientific,4309155)在定量实时PCR系统(Roche,LightCycler 480)上进行qPCR分析。使用Gapdh基因进行数据分析的内部对照和使用2△△-Ct方法计算的循环阈值(Ct)值。

基因富集分析

用于注释、可视化和集成功能注释工具的数据库用于执行基因本体(GO)术语,包括BP、细胞成分和分子功能,以及京都基因和基因组百科全书(KEGG)途径富集分析。校正p值< 0.05被视为显著富集。

PPI网络和模块分析

蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络是通过使用Metascape检索相互作用基因而构建的。上传的基因被聚集成网络以检测重要的功能模块。Cytoscape用于可视化PPI网络,并计算基于蛋白质信息相互作用的网络。

 

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