在科研实验中，小鼠寄生虫感染常成为实验数据异常的 “隐形干扰源”。不少研究者曾遭遇类似困境：实验数据出现无因波动，镜检时却因操作不规范、鉴别能力不足，难以精准判断寄生虫感染情况。为助力科研工作者高效开展 SPF 级小鼠寄生虫检测，保障实验数据的准确性与可靠性，本文系统梳理标准化检测流程、虫体鉴别要点及实操关键技术，为实验质量控制提供核心支撑。
一、体外寄生虫监测：标准化操作流程
体外寄生虫检测是 SPF 级小鼠日常监测的核心环节，需根据检测场景选择适配方法，确保采样规范与样本质量。
（一）肉眼观察法：系统排查体表异常
操作规范：将小鼠置于体式显微镜下，用镊子有序翻动被毛，全面观察体表皮肤、毛发状态，重点排查耳根、颈后、背脊部、腹股沟等寄生虫高发部位。注意事项：轻度感染通常无明显临床症状，文献报道中曾出现肉眼观察 “无异常” 但镜检螨虫阳性的案例，最终导致肿瘤模型实验整季重复。因此，肉眼观察仅为初步筛查，需配合后续镜检确认。
（二）透明胶带粘取法：标准化样本制备
作为体外寄生虫检测的标准方法，该方法无创、快捷，适用于常规监测，操作步骤如下：
剪取 2.5cm 宽、与载玻片等长的透明胶带；
按 “头 - 颈 - 背 - 腹 - 臀” 顺序，在耳根、颈后、背脊部、腹股沟等关键部位逆毛粘取，力度以毛发微弯为宜；
需重点粘取肛门周围区域（虫卵常见藏匿部位）；
将胶带平整粘贴于载玻片，完成样本制备。
关键要点：样本量需以透过胶带可辨识字迹为标准，不足将导致检测失败。
（三）刀片刮取法：针对皮肤病变样本
当小鼠出现皮肤增厚、结痂等症状时，需采用刮取法检测，操作如下：
浅表刮取（疥螨检测）：用钝刀片垂直皮肤表面，刮至皮肤轻微发红；
深层刮取（蠕形螨检测）：需刮至轻微渗血，因蠕形螨寄生于毛囊内；
刮取的皮屑样本用透明胶带粘取后编号待检，操作时需佩戴手套，避免交叉感染。
二、寄生虫形态学鉴别：显微镜下特征识别
（一）体外寄生虫种类及形态
鼠癣螨 (Myocoptes musculinus)：雌虫呈卵圆形或椭圆形（340μm×180μm），第 3、4 对足较粗大，体后有一对长刚毛；雄虫体型较小（200μm×140μm），第 4 对足特化为抱握器结构，末端有粗短钩爪样结构，显微镜下易识别。
鼠肉螨 (Myobia musculi)：体型细长，雌虫 0.4mm，雄虫 0.3mm，体后端有两根刚毛，雄虫两毛间距较雌虫更近。
柏氏禽刺螨：具 4 对足、无翅；雄性腹部通常有 1 个骨板，雌性腹部有 3 个骨板，体表覆刚毛。未吸血时大小 0.3-0.7mm，呈白色或淡黄色；雌虫吸血后可超过 1.0mm（肉眼可见），呈棕褐色，背板刚毛及八对步足为核心鉴别特征。
（二）体内寄生虫种类及形态（肠道寄生生物）
解剖小鼠盲肠内容物时，需重点识别以下寄生虫：
纤毛虫：椭圆形，无色透明或淡灰略带绿色，虫体极易变形，前端有略倾斜的沟，滋养体表面覆斜向纤毛，通过纤毛摆动作旋转运动。
贾第鞭毛虫：正面观为梨形，侧面观为半月形，虫体以左右晃动方式运动，包囊呈椭圆形。
阿米巴原虫（变形虫）：滋养体阶段可伸出伪足，形态多变；包囊直径 10~30μm，未成熟包囊含 1~4 个核，成熟包囊含 8 个核，碘液染色后细胞核结构清晰可见。
隐匿管状线虫：肠道常见线虫，雌虫体长 3-5mm，雄虫 1-1.4mm，尾部细长。
隐匿管状线虫虫卵：虫卵一侧平直、一侧圆凸，与四翼无刺线虫卵（标准椭圆形，87.5-90μm×34.5-41μm）的鉴别要点为 “平凸为隐，椭圆为翼”。
三、镜检操作规范：从准备到清洁全流程
（一）体外寄生虫镜检标准步骤
开机准备：启动生物显微镜，调节反光镜和光源，确保视野明亮均匀；
上样技巧：将胶带玻片固定于载物台，使样品对准通光孔，下降载物台时需从侧面观察，避免物镜与玻片碰撞；
调焦规范：先使用 4 倍物镜寻找目标（视野范围大），再换 10 倍物镜观察细节，调焦遵循 “先降后升” 原则，缓慢调节粗准焦螺旋；
观察顺序：从玻片左侧开始，按 “左→右→上→下”S 形移动载物台，确保全面覆盖，避免漏检（曾有研究者因漏检玻片右上角导致整批样品重测）。
（二）体内寄生虫检测特殊操作
取 30μL 盲肠内容物（约一滴）置于载玻片中央；
滴加等量生理盐水，用牙签轻柔混匀；
盖玻片从一侧 45 度角缓慢放下，避免产生气泡（气泡会干扰观察）；
400 倍镜下观察，重点识别具有运动性的活虫体（死虫体易与杂质混淆）。
（三）清洁消毒规范
镜检结束后，用 75% 酒精擦拭载物台（禁止直接喷洒镜头，以免损坏镀膜），下降载物台并套上防尘罩，严格遵循生物显微镜使用规范，保障仪器性能。
四、常见问题 Q&A：技术规范解答
Q：透明胶带粘取法和刀片刮取法哪个更准确？
A：日常监测首选胶带法（无创、操作快捷），皮肤有病变时需采用浅表皮肤刮片法（适用于疥螨 / 蠕形螨检测），两种方法适配不同检测场景。
Q：显微镜下如何区分虫卵与杂质？
A：虫卵具有特征性形态（如蛲虫卵的半月形），杂质边缘模糊无固定结构；鉴别困难时可滴加染色液，虫卵着色后结构更清晰。
Q：外观健康的小鼠是否需要进行寄生虫检测？
A：必须检测！寄生虫感染早期通常无明显症状，SPF 级实验小鼠国标要求每季度至少监测一次。
Q：镜检未发现虫体时应如何处理？
A：首先确认采样操作是否规范（胶带粘性、刮取深度等）；可采用 10% 氢氧化钾溶液透明化处理样本，提高虫体结构可见度。
Q：检测阳性后如何处理？
A：立即隔离阳性小鼠，全群驱虫，环境彻底消毒（螨虫卵耐高温，需 121℃高压灭菌 30 分钟），及时通知动物房，防止阳性动物流入其他实验。
Q：不同品系小鼠对寄生虫的易感度是否存在差异？
A：C57BL/6 品系对螨类更敏感，BALB/c 品系易感染肠道线虫，进行品系比较实验时建议分开检测。
Q：寄生虫检测是否会影响小鼠后续实验？
A：胶带法和刮取法对实验小鼠损伤极小，24 小时后即可恢复；体内寄生虫检测需处死小鼠，属于终点检测。
Q：镜检样本量有何要求？
A：体外检测建议每笼随机选取 3 只，体内检测每组至少 5 只，样本量不足易导致假阴性结果。
Q：如何对镜检结果进行存档？
A：推荐使用显微镜相机适配器进行图像采集（实验室常规配置），手机拍照易因手抖导致图像模糊，且分辨率通常无法满足存档要求。
Q：寄生虫检测执行的国标版本是什么？
A：当前执行《实验动物 微生物、寄生虫学等级及监测 GB14922-2022》，该标准为国内强制执行的实验动物寄生虫学监测规范。
结语
寄生虫检测是 SPF 级小鼠实验质量控制的关键环节，其操作规范性直接决定实验数据的可靠性。从标准化采样、精准形态鉴别到规范镜检操作，每一个步骤都需严谨执行。熟练掌握鼠癣螨、纤毛虫等常见寄生虫的鉴别特征，严格遵循国标要求开展监测，方能为科研实验筑牢质量防线。严谨的寄生虫检测流程，是科研工作者保障实验结果准确性的核心能力之一。
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