药康生物 · 临床前研究洞察

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作者｜药康生物品牌营销部

做肿瘤药效评价的研发团队，几乎都有行业惯例：皮下荷瘤模型选用6–8周龄小鼠。

翻看高分文献和IND申报资料，清一色都是这个周龄区间。大家照着文献抄方案、照写方法部分，却很少被问到一个核心问题：为什么是6–8周？这个区间背后的科学依据是什么？4周和12周到底差在哪里？

更关键的是，周龄的规范报告在论文投稿和IND申报中都有明确要求。ARRIVE 2.0指南将动物周龄列为Essential 10必报项[1]，并特别指出仅写成年鼠不够精确——6到20周都可被称为成年；在IND申报的非临床研究中，动物选择依据和批次内均一性也是审评关注的基础信息。周龄报告不充分、均一性控制不严，都可能在审稿或审评中被要求补充说明。

小鼠周龄直接决定肿瘤微环境、免疫状态、代谢水平和成瘤稳定性。选对周龄只是第一步，说清为什么选、如何控制均一性，才是实验严谨性的真正体现。

本文结合ARRIVE 2.0指南、最新肿瘤免疫微环境研究和药康生物在模型标准化领域的实践经验，把6–8周标准背后的免疫机制、不同周龄的适用边界、以及审稿与申报中的规范性要求一次性讲透。

01 6–8周成为行业共识的三重依据

6–8周龄小鼠之所以成为肿瘤移植模型的标准化窗口期，不是历史偶然，而是基于生理、免疫和方法学三重层面的科学共识。理解这三点，才能在被审稿人或审评专家追问时给出有说服力的回答。

第一，生理状态稳定，个体差异最小。小鼠6周龄完成断奶后发育、性成熟启动，器官发育定型，代谢速率、激素水平、生长状态趋于统一，彻底摆脱幼龄期发育波动问题。这一阶段小鼠体重、体能、应激耐受度高度均一，能最大程度降低组内实验误差，保证数据重复性。

第二，肿瘤微环境适配性极佳，成瘤稳定。对于裸鼠、免疫缺陷小鼠，6–8周阶段免疫缺陷表型最稳定。裸鼠无功能性T细胞，且NK细胞、固有免疫细胞活性处于适中水平[2]，既不会强烈排斥异种肿瘤细胞，也不会因免疫过度缺陷导致瘤体异常疯长、囊性变频发，肿瘤生长曲线平缓，完美适配药效梯度评价。

第三，符合全球预实验对照标准，可追溯、可对标。大量已发表的肿瘤药效研究普遍采用6–8周龄小鼠作为标准实验动物，这一区间也符合ARRIVE 2.0对实验动物信息规范报告的要求[1]。选用该区间小鼠，实验数据可与既往海量文献横向对比，便于结果的可重复性验证。

02 4周幼鼠：不是不能用，而是适用场景有限

一个常见疑问是：4周小鼠体型小、免疫弱，成瘤率似乎更高，为什么不推荐用于常规药效评价？答案并非绝对禁用，而是要看研究目的和数据的临床转化价值。

4周龄幼鼠免疫系统尚未发育完全，T细胞、NK细胞功能不成熟[2]，肿瘤细胞定植阻力小，短期成瘤速度确实更快。但成瘤快不等于数据可靠，该周龄用于常规药效评价存在三个需要正视的问题。

发育未成熟，实验变量不受控。4周小鼠处于快速生长发育期，器官、代谢、肠道菌群、激素水平每日都在剧烈变化。实验周期通常2–4周，实验全程小鼠持续高速生长，生长带来的生理波动，会完全覆盖药物的微弱药效差异，极易出现假阳性、假阴性结果。

肿瘤微环境异常，数据无临床参考性。幼鼠血管新生、细胞增殖速率远高于成年鼠，会导致肿瘤生长过快、坏死、囊性变概率大幅上升。这种非正常快速成瘤模型，和临床肿瘤发生发展机制差异极大，审稿人会直接判定：模型微环境不标准，转化价值不足。

应激耐受差，组内死亡率、脱靶率高。幼鼠抗应激、抗操作损伤能力弱，灌胃、测量、抓取等常规操作，极易引发应激反应、体重骤降，导致小鼠中途脱组，样本量缺失，实验完整性受损。

因此，4周鼠更适合发育学、幼龄疾病等特定研究方向；用于常规抗肿瘤药效评价时，需充分说明选择理由并评估其对数据转化价值的影响。

03 12周以上：老年模型有其价值，但需明确说明与对照

12周以上小鼠并非不能用于肿瘤研究——事实上，老年肿瘤模型正是模拟临床老年患者的重要工具。关键在于：使用偏大周龄小鼠时，必须充分理解其免疫微环境已发生本质性重塑，并在方法学中明确说明、设置合理对照。近年来肿瘤免疫领域的最新研究，为理解这一问题提供了坚实的分子机制证据。

图1：不同周龄小鼠免疫状态差异示意图（资料图）

裸鼠免疫功能部分恢复，成瘤阻力剧增。核心关键：裸鼠并非终身完全免疫缺陷。随着周龄增长，12周以上裸鼠会出现NK细胞活性回升、残余免疫功能代偿[2][3]，对异种移植肿瘤的排斥能力显著增强。直接后果是肿瘤定植率下降、生长缓慢、生长曲线参差不齐，组内数据标准差爆炸，原本有效的药物，极易测出阴性结果。

衰老肿瘤微环境重塑免疫格局。2024年发表于Nature Immunology的研究[4]"The aged tumor microenvironment limits T cell control of cancer"揭示，随着小鼠周龄增长（从10周到68周），肿瘤生长显著加快，而肿瘤内CD8+ T细胞浸润和功能持续下降。研究发现，衰老肿瘤微环境会驱动一种独特的、与经典T细胞耗竭不同的"年龄相关功能障碍"T细胞状态（T_TAD），同时NK细胞-树突状细胞轴发生改变。这意味着，使用周龄偏大的小鼠，其肿瘤微环境已发生本质性重塑，所得药效数据与标准模型不具可比性。

免疫衰老驱动免疫治疗耐药。2024年Nature Communications发表的研究进一步证实，细胞衰老通过诱导免疫抑制性肿瘤微环境，导致免疫治疗耐药[5]。衰老微环境中MDSC、Treg和衰老基质细胞富集，而细胞毒性T细胞浸润减少。2026年Frontiers in Immunology的综述也指出，免疫衰老显著限制PD-1/PD-L1阻断疗法在老年肿瘤中的疗效[6]。这些发现提醒我们：在免疫治疗药物的临床前评价中，小鼠周龄的选择直接影响药效结论的可靠性。

个体老化差异增大，均一性控制更关键。12周以上小鼠逐步进入成年后期，代谢能力、脏器功能、免疫状态的个体化差异开始显现。这意味着使用偏大周龄小鼠时，对批次内周龄范围、体重分布、健康状态的控制要求更高，以确保各组基线的可比性。

04 审稿与IND申报：周龄不是选对就行，方法学描述才是关键

很多研发团队的周龄选择本身没有问题，但在论文投稿或IND申报中仍被要求补充信息，原因往往不是选错了，而是没有在方法学中说清楚。周龄作为实验基线变量，其选择依据、范围控制和排除标准，是ARRIVE 2.0指南明确要求报告的内容，也是非临床研究审评中的基础信息。

ARRIVE 2.0指南明确要求报告动物周龄。ARRIVE 2.0在Essential 10第8条实验动物中要求[1]：必须报告动物的品系、性别、周龄或发育阶段、体重范围以及来源。指南特别指出，对大多数物种而言，精确报告周龄比描述发育阶段更有信息量——仅写成年鼠是不够的，因为6到20周的小鼠都可被称为成年。

方法学中易被要求补充的三个信息点。结合ARRIVE指南要求和肿瘤研究的方法学规范，以下三方面信息不完整时最容易在审稿中被要求补充：一是周龄区间的选择依据，尤其当使用非标准周龄时；二是各组小鼠的实际周龄范围和体重分布是否均衡；三是如果使用了老年模型等偏离标准的设计，是否设置了合理对照并讨论其对结果的影响。

IND申报中，不同研究类型对周龄的要求不同。毒理学研究有明确的周龄范围规定——NMPA《重复给药毒性研究技术指导原则》要求一般大鼠为6～9周龄[8]，FDA Redbook要求啮齿类给药不晚于6～8周龄[9]；而肿瘤药效学研究的周龄选择更多基于行业共识和科学依据，法规层面强调的是动物选择依据的说明和批次内均一性控制，而非强制某个特定周龄。无论哪种研究，研发团队都应保留周龄核对和入组标准的原始数据，以支撑数据的可重复性和审评可信度。

两种可合理偏离6–8周的场景。并非所有肿瘤模型都必须使用6–8周，以下两种情况在方法学中明确说明即可被接受：一是老年肿瘤研究，选用10–12周及以上小鼠模拟临床老年患者的衰老微环境，需同时设置年轻对照组；二是化学诱导原发瘤模型（如AOM/DSS肠癌），需小鼠达到一定生理成熟度，可选用8–10周启动造模。

05 药康生物：标准化模型供应与临床前服务

作为全球领先的基因工程小鼠模型研发企业，药康生物拥有22,000余种基因工程小鼠品系，年模型创制通量达6,000余种，累计服务全球5,500余家客户。在肿瘤药效评价领域，药康生物自主研发的NCG重度免疫缺陷小鼠（敲除Prkdc及Il2rg基因）已被广泛应用于异种移植瘤模型构建。

药康生物提供从靶点验证、药效评价、PK/PD分析到IND申报支持的一体化临床前CRO服务，所有模型动物均严格控制周龄、体重和健康状态，确保批次内均一性和实验可重复性。研发团队在实验设计阶段即可获得周龄选择的专业建议，从源头降低方法学描述不充分带来的审稿和申报风险。

药康生物始终以创新模型、无限可能为理念，致力于为全球研发团队提供标准化、高质量的动物模型和临床前服务，助力每一个创新药物从实验室走向临床。

参考文献

[1] Percie du Sert N, Hurst V, Ahluwalia A, et al. The ARRIVE guidelines 2.0: Updated guidelines for reporting animal research. PLoS Biol. 2020;18(7):e3000410.

[2] Qin J, Zhang Z, Cui H, et al. Biological characteristics and immune responses of NK Cells in commonly used experimental mouse models. Front Immunol. 2024;15:1478323.

[3] Hanna N, Davis TW, Fidler IJ. Environmental and genetic factors determine the level of NK activity of nude mice and affect their suitability as models for experimental metastasis. Int J Cancer. 1982;30(3):343-349.

[4] Chen ACY, Jaiswal S, Martinez D, et al. The aged tumor microenvironment limits T cell control of cancer. Nat Immunol. 2024;25(6):815-828.

[5] Maggiorani D, Le O, Lisi V, et al. Senescence drives immunotherapy resistance by inducing an immunosuppressive tumor microenvironment. Nat Commun. 2024;15(1):2570.

[6] Niu X, Nur Z, Xie W, et al. Immunosenescence shapes the tumor immune microenvironment and limits PD-1/PD-L1 blockade efficacy in older patients with cancer. Front Immunol. 2026;17:1781004.

[8] 国家药品监督管理局. 重复给药毒性研究技术指导原则.

[9] U.S. Food and Drug Administration. Redbook 2000: IV.C.4.a Subchronic Toxicity Studies with Rodents.