小鼠乳腺癌4t1细胞的培养笔记
4T1细胞是从410.4瘤株中未经诱变筛得的6-硫鸟嘌噙抗性细胞株。当4T1细胞注射到BALB/c小鼠中时,4T1细胞会自发产生高转移肿瘤,可转移到肺、肝、淋巴结和大脑,同时在注射部位形成始发灶,诱导转移时不需要摘除始发灶。4T1细胞在BALB/c小鼠中的生长与转移特性与人体中的乳腺癌十分相近,这种肿瘤是人Ⅵ期乳腺癌的动物模型。
4T1乳腺癌细胞培养观察日记:
最近养了4T1乳腺癌细胞,发现这个细胞还是很有个性的。
细胞状态好的时候生长特别旺盛,代谢很快,所以养这个细胞需要勤快,基本上每天都需要操作,一般是一天换液,第二天传代,在50%以上就可以传代了,1传3-4都可以,稍微长的太满达到80%以上,接下来传代后的状态就有影响。
细胞贴壁比较牢固,我开始用5%胰酶消化3分钟后,用完全培养基终止消化,吹打不下来。延长消化时间后发现传代后的细胞状态很差。所以可以在37℃消化3分钟后用胰酶液吹下来后在加培养基终止。
还有就是这个细胞很容易出现培养瓶边缘角落消化不完全出现累计的现象,这一部分出现凋亡会影响到整个培养瓶的细胞状态。
此段培养笔记来源丁香园论坛用户:Raoqi92
小鼠乳腺癌培养操作步骤 :
换液周期:2-3天
培养基体积:T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml
传代比例:1:2-1:4(具体情况视细胞生长速度及密度决定)
传代方法:
1.尽量吸干净T25瓶原培养基;
2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s,吸走润洗的PBS;
3.T25瓶加1ml左右胰酶,轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层;
4.将培养瓶放入37度培养箱消化;
5.消化到细胞间隙变大,但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化;
6.混匀细胞,900rpm离心3-5min,弃上清;
7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞,均匀分到新的培养瓶里;
8.补足完全培养基,将培养瓶放回培养箱静置培养;
注意事项:不同品牌胰酶消化时间差别较大,注意严格控制消化时间消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔,不要产生过多气泡以免影响细胞状态。